用试剂盒提取微生物DNA

问题描述：

用试剂盒提取微生物DNA
“在每个取样点,无菌操作称取样品10.0g碎肉样,于盛有90mL生理盐水的锥形瓶中,摇床振摇15min（280rpm,4℃）.取30mL于一灭菌离心管中,200×g离心5min.取10mL上清于另一灭菌离心管中,12000×g离心5min.离心所得沉淀,采用试剂盒提取.”
初学者求助：
这两次离心是否需要冷冻离心?
为了让所提取的DNA能代表样品中微生物的多样性,是否总个提取过程都要在无菌室内操作（离心机不在无菌室）?离心管是否可以普通离心管,灭菌后用,还是必须买无菌离心管?

1个回答分类：生物 2014-12-12

问题解答：

我来补答

离心都要4度离心.
离心管是否需要灭菌看你样品下游应用和整个实验目的.对于你这个似乎是检测肉储藏时间和其上细菌分布的实验,离心管是要灭菌的.根据塑料材质,离心管有可高压灭菌不可高压灭菌.根据你离心管说明书确定能否高压灭菌
提取过程是否要无菌操作,需要看你下游的应用.
如果你是要拿这些DNA去PCR然后跑DGGE或者高通量测序,那么提DNA要无菌操作.离心机不需要在无菌室.只需要你的内容物无菌.盖上盖子外壁有没有菌都没关系
再问：我做的是检测肉在其贮藏期间的微生物的多样性的研究，提DNA，然后高通量测序。是否有必要直接买无菌离心管，离心管灭菌后，但是DNA还在呀？
再答：如果经费充足，就买那种无菌离心管。一般大家都认为，DNA在高温灭菌后就降解了。但是有一些论文，实验证明并不是所有DNA都能降解，并且在灭菌过程中可能会在灭菌锅里有交叉DNA污染。对于你的实验，关键不在于那些占大多数的细菌，而在于只占群落一小部分的那些细菌，所以要确保DNA没有污染

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