植物染色体制片技术是植物细胞遗传学、染色体工程、植物细胞生物学、植物细胞分类学和物种生物学等众多学科的基本实验技术.植物染色体的研究由于和植物遗传育种工作的结合而获得良好的发展.因此,植物染色体的技术在这些研究工作中具有特别重要的意义[1-3].Belling(1921)提出染色体压片技术后,植物压片已成为植物染色体研究中广泛应用的常规技术[1].但是由于植物细胞有很坚实的细胞壁,染色体很难像动物染色体那样平整地贴在载玻片上.陈瑞阳(1982)提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗法.本文以韭兰为材料,对植物染色体常规压片,去壁低渗法制片技术、染色效果进行了比较,以期在不同的材料及条件下选择适宜的染色体制片技术,从而获得较好的效果.
1 材料与方法
1.1 供试材料 试验用植株由校园内采集.
1.2 根尖制片
1.2.1 常规压片 通常是在早上9-10点采集葱兰的根然后在室温下放入0.1％秋水仙素溶液中进行预处理处理8 h.然后就在常温把材料放在卡诺氏固定液下固定10m,接下来就在1 mol／L盐酸溶液中解离到松软刚合适为止.最后是用蒸馏水将葱兰根冲洗干净,这样前处理就结束.处理完后就可以用醋酸洋红染色或改良苯酚品红染色[4].压片/涂片后选取典型的染色体,在40倍物镜及油镜下显微照相.
1.2.2 去壁低渗法 去壁低渗法也是把材料放0.1％秋水仙素溶液中进行预处理处理8 h.然后前低渗即是将根尖放在0.075 tool／L KCI低渗液中,在20～25℃条件下处理0.5h.接下来就是最关键的去壁,倒去KCI溶液,加入2.5％混合酶液,在25～30℃温度下处理2～5 h左右.去壁后要进行后低渗,使细胞完全胀,即是用20～30℃蒸馏水慢慢冲洗2～3次后,再将根尖放在0.075 tool／L KCI低渗液中处理.
