1503年 列奥纳多·达·芬奇回到佛罗伦萨,开始绘制《蒙娜丽莎》（51岁】500年来,人们一直对《蒙娜丽莎》神秘的微笑莫衷一是.不同的观者或在不同的时间去看,感受似乎都不同.有时觉得她笑得舒畅温柔,有时又显得严肃,有时像是略含哀伤,有时甚至显出讥嘲和揶揄.在一幅画中,光线的变化不能像在雕塑中产生那样大的差别.但在蒙娜丽莎的脸上,微暗的阴影时隐时现,为她的双眼与唇部披上了一层面纱.而人的笑容主要表现在眼角和嘴角上,达·芬奇却偏把这些部位画得若隐若现,没有明确的界线,因此才会有这令人捉摸不定的“神秘的微笑”.荷兰阿姆斯特丹的一所大学应用“情感识别软件”分析出蒙娜丽莎的微笑包含的内容及比例：高兴 83％,厌恶 9％,恐惧 6％,愤怒 2％. 哈佛大学神经科专家玛格丽特·利文斯通博士说,蒙娜丽莎的微笑时隐时现,是与人体视觉系统有关,而不是因为画中人表情神秘莫测.利文斯通博士是视觉神经活动方面的权威,主要研究眼睛与大脑对不同对比和光暗的反应.利文斯通说：“笑容忽隐忽现,是由于观看者改变了眼睛位置.”她表示,人类的眼睛内有两个不同部分接收影像.中央部分(即视网膜上的浅窝)负责分辨颜色、细致印记.环绕浅窝的外围部分则留意黑白、动作和阴影.据利文斯通说,当人们看着一张脸时,眼睛多数集中注视对方的双眼.假如人们的中央视觉放在蒙娜丽莎的双眼,较不准确的外围视觉便会落在她的嘴巴上.由于外围视觉并不注重细微之处,无形中突出了颧骨部位的阴影.如此一来,笑容的弧度便显得更加大了.不过,当眼睛直视蒙娜丽莎的嘴巴,中央视觉便不会看到阴影.利文斯通说：“如果看着她的嘴巴,便永远无法捕捉她的笑容.”蒙娜丽莎的笑容若隐若现,源于人们的目光不断转移.利文斯通指出,若要临摹《蒙娜丽莎》,描绘口部时便要望着别处.
