奇怪,高中生物我以前怎么没学这些.还好我是研究微生物方向的.我就一字字打给你吧,希望你有用没用看它个50%以上吧,别让我白忙就行.以下回答绝对权威,表述有些未采用专用术语.
针对你所问的三个大范围的问题,我只能简单的介绍一下.
1、培养基就是微生物生长繁殖的物质和环境基础,培养基含有氮源,碳源,水,生长因子等等.可以分成固体培养基,液体培养基,天然培养基,合成培养基,选择培养基等等.不同培养基的功能不同,有的是活化微生物用的,有的是选择微生物用的,有的则是保藏微生物用的.根据具体的目的和微生物的种类,选择不同的培养基.而且选择的培养基所用的营养成分的比例根据具体需要而定.至于保藏的方法,有短时保藏,也有长时间冻藏的,保藏方法也有很多,你所说的临时保藏就是斜面试管4摄氏度保藏法,它是将微生物划线于斜面试管培养基上,而后4摄氏度低温保藏.是需要培养基的.甘油保藏法也有几种不同的操作方法,有的是【无菌水+细菌】和甘油以不同比例混合成10%-40%不等的甘油浓度保藏液,有的则是【培养基（液体培养基）+细菌】和甘油按比例混合成10%-40%不等的甘油保藏液,而后于-20摄氏度条件下冻藏,保藏期通常数年.所以也是需要培养基的.这也是众多培养基中的一小部分而已.第一个问题先告一段落吧.
2、有点晕,第二个问题更复杂.你所说的稀释涂布平板法主要是用于细菌的分离和纯化步骤上,由于菌悬液浓度过高时,接种于培养基上会出现密密麻麻的菌落,菌落之间相互重叠,也就失去了分离纯化的意义.菌悬液浓度太低的话可能你涂布到平板上的菌悬液中没有了你需要的细菌.也无法分离出目的细菌.
对于你说的一步到位,是多少浓度合适呢?你不知道,所以就只能10倍,100倍,1000倍,10000倍的稀释下去,然后每个浓度的菌悬液都涂布相应的平板,这样,就可以保证会有一种浓度比较合适,能够分离纯化出你要的细菌.当然了,如果你一次性稀释的恰到好处,也是可以的,能分离到纯的单菌落没人敢否认你,不过就是这样的成功率不高,或者说很难.这种方法也是挺麻烦的,不过稀释也是很简单的操作.不知道这样说你能否明白?
3、第三个问题稍微好叙述些.原理：单纯的水在-20摄氏度会结成冰晶,破坏细胞壁和细胞膜,使细菌死亡.甘油则不会形成冰晶,可以保持细胞壁和细胞膜的完整性.同时由于100%的甘油不能将细菌均匀混合,太黏了也不太会流动,所以要稀释成10%-40%浓度的甘油,我们实验室一般使用20%终浓度的甘油进行保种,注意是终浓度20%,不是浓度为20%.如果浓度低于15%或10%,同样会有冰晶,会破坏细胞壁和膜.另一个面,细菌毕竟是细菌,不是高等生物,它们的抗逆性很强,-20摄氏度不会杀死它们,只是抑制了它们的活性,因而它们停止了生长,进入一种类似休眠的状态,但条件合适时,它们会继续繁殖.当然经过甘油-20摄氏度低温保藏的菌种在使用之前是要经过活化的,注意了,这就是我前面所说的活化培养基,它是一种营养环境,目的是让处于休眠的细菌醒过来,恢复活力.这再另一方面回答了你培养基有什么用的问题.它还有活化细菌的作用.别说-20摄氏度不会冻死细菌,有些细菌在100度的温度下都能存活的,当然这样的细菌是嗜极细菌就是了.
说了这么多,也不知道你有没认真看完,是否看明白了.别让我辛辛苦苦打这么多字你就随便瞄几眼.还有就是如果看明白了,也希望你把分给我吧,最近问了些基因克隆方面的问题,分用了不少,所以现在正在挣分数.
