BrdU检测细胞增殖的方法

细胞增殖的检验方法：BrdU标记法

1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片）,培养1天,用含0.4％FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0 期.
2、终止细胞培养前,加入BrdU（终浓度为30μg/L）,37℃,孵育40min.
3、弃培养液,玻片用PBS洗涤3次.
4、甲醇/醋酸固定10min.
5、经固定的玻片空气干燥,0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶.
6、5％正常兔血清封闭.
7、甲酰胺100℃,5min变性核酸.
8、冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50）,阴性对照加PBS或血清.
9、按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数（LI）.