荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办

1、调整下体系,不要自己配置反应液,最好用商品的MIX,这样各个组分都是最佳的配比.
2、三步法改为两步法,退火延伸设置为一步,大部分的温度为60度,这个只是建议,具体看你买的试剂的说明书,会有具体的说明.
3、很有可能有非特异性扩增,自己排查下反应体系,根据溶解曲线是否单峰,扩增曲线CT值综合分析.
再问： 谢谢，溶解曲线是单峰，反应液是SyBR，ROX、cDNA，引物，体系没得改了，退火延伸设为一步的意思是把温度都设为60吗？时间是多少，还需要考虑自身引物的退火温度吗
再答： 不同公司的酶其时间是不一样的，一般为30s至1分钟，一切看产品说明书。建议再做一次，如果还是相同的情况就直接给试剂公司的客服打电话。