问题描述:
PCR产物酶切的问题
我做的是PCR-RFLP法分析SNP:
引物是参照文献设计,takara合成的.
订购的是takara的Taq酶.
PCR 条件也是文献中的,1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp.
用文献报道的Msp I文字1μL,PCR产物10μL,酶切4小时,3%琼脂糖电泳显示产物为310bp.切开的片段应该为168bp和122bp.
为什么酶切产物变大了?为什么PCR产物没有被切开呢?
试了很多次都不行,也换过很多模板,但都是这种情况,takara书上说可能是蛋白质的影响,但是酶切产物电泳同时使用了内切酶提供的10×buffer还是这种情况,是在是困惑!
我做的是PCR-RFLP法分析SNP:
引物是参照文献设计,takara合成的.
订购的是takara的Taq酶.
PCR 条件也是文献中的,1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp.
用文献报道的Msp I文字1μL,PCR产物10μL,酶切4小时,3%琼脂糖电泳显示产物为310bp.切开的片段应该为168bp和122bp.
为什么酶切产物变大了?为什么PCR产物没有被切开呢?
试了很多次都不行,也换过很多模板,但都是这种情况,takara书上说可能是蛋白质的影响,但是酶切产物电泳同时使用了内切酶提供的10×buffer还是这种情况,是在是困惑!
问题解答:
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