请教Western blotting!

楼主赶着出结果吗?三步并作两步,两步毁成一步……
个人强烈不建议三种ist antibody加在一起,因为这样做,三种抗体的nonspecific bands会重叠,遮盖需要分辨的蛋白.除非,你能确定这三种抗体的基质特异性非常高,否则,洗出来的照片就是一团黑.
如果,你真得很着急,推荐下面这个办法.如果你能确定这三种蛋白的大小相差很多,比如说A=250k B=120k C=75k.那么你就可以把VDPF Membrane切成三段,分别进行1st immunoblot,同样省时而且结果更干净.唯一需要注意的是,这样做的结果好像是不可以公开发表的（至少在我们这里是这样）,因为blot的条件不同,如果你只想测试蛋白性质,那么完全没关系.
第二个问题,因为我本身没做过CBB染色,不敢妄言.在实验室里问了一小圈,不管是东洋鬼子还是西洋鬼子都告诉我如果洗净（具体方法我没问）足够的话不排除可能可以.但大家都说比较adventurous,劝楼主慎重.