请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?
再问： 不知道，我是个新手什么都不懂
再答： 那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来滴。。。 Tm是DNA融化温度，就是双链打开成为单链的温度。跟引物序列中的GC含量有关，也受到你反应溶液中引物浓度和盐浓度的影响。在这个网站输入引物序列以后可以查到： http://frodo.wi.mit.edu/primer3/ 两个引物Tm差太多，或者PCR程序设置的Ta 温度不对应引物Tm， 都会导致PCR反应效率降低。而你的看家基因和目的基因引物有可能Tm不一样，那么同时反应，结果不能很好地代表真实表达量。如果问题是在这里，解决办法是重新设计看家基因的引物。 以上全部假设你的引物对在其他指数上没有问题。如果你的引物对本身设计得就不好，那也有可能造成你所遇到的问题，解决办法还是重新设计。