请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么

建议你还是选择CDS区不一样的地方设计引物吧,这样可以避免交叉污染引起的非特异扩增,扩增的序列长度不一定要一样,每个引物你最好设计两三对,然后做一个相对定量看看不同引物的扩增效率,选择比较好的两对引物做后续试验,内参基因的引物不需要跟目的基因的扩增产物一样长,这样你设计引物的时候很受限制,总体产物长度在80-150bp之间都是可以接受的,主要是做相对定量的时候不同引物之间的扩则效率要比较接近,这样才有可比性.