如何确定pcr反应中最佳循环数

问题描述:

如何确定pcr反应中最佳循环数
我收到杂志的修改说明,让我说一下如何确定的rt-pcr反应循环数,我的是25个循环,我当时只是参考文献没有做梯度pcr确定,现在也不确定25个循环是否到了平台期,我怎么改呢,就说我是参考文献,这合适吗,
1个回答 分类:综合 2014-10-22

问题解答:

我来补答
是反转录PCR么?如果是real time的话应该可以确定是否到平台期吧?
以参考文献来回答也是可以的.关键你要明白对方为什么问这件事.如果没有任何迹象表明你的实验结果不能很好支持你的结论的话,是不应该吸引到杂志的注意力的.
由于不知道你的实验具体情况.简单猜测他们问这件事可能是因为25个循环对普通的反转录PCR来说好像属于比较少,我一般看家基因都做30个循环.所以,如果你得出了阴性的结果可能被质疑为假阴性.这个时候最好的办法当然是用阳性对照来证明循环数足够了.
 
 
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