pcr产物电泳时,用反转的dna的同一个样分别扩内参、目的1和目的2.内参和目的1都很好,目的2却很浅很浅?

问题描述:

pcr产物电泳时,用反转的dna的同一个样分别扩内参、目的1和目的2.内参和目的1都很好,目的2却很浅很浅?
三者因所用退火温度,循环数不同,是分三次分别扩增的.之后电泳结果时内参和1非常好,2却非常浅几乎看不到.看到有些建议是加大模板量,既然我用同一个样,目的1能扩出来很好说明模板没有问题,模板的量也应该是可以的.并且目的2在该组织中并不是本身低表达的,我加大模板量有用吗?应该怎么办?另外,我把内参和目的1上到同一个上样孔里,buffer和样品分别该加多少?
1个回答 分类:综合 2014-09-25

问题解答:

我来补答
你是一直都这样还是单次啊?如果是单次的话建议换一批cDNA试试,因为做实验这种事情有时候分析得再合理,结果还是不靠谱,我前几天还有过内参p不出来的现象,目的条带都巨亮无比,又能说什么呢,有时候就是这么不正常~~~
如果是一直都这样,试过加大循环数和加大模板量都没有用的话,我还有一个不太常规的办法
你可以把你的目的2跑的胶切下来(就像是回收那样的切),放到EP管了,放到负20度冻起来,然后拿出来,化了之后ep管里会有几微升的水,把它吸出来当模板用,试试吧
当然有可能是引物的原因,你可以再看看目的2的引物看看有没有问题
 
 
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