基本的基因工程技术步骤简单来说五个字：切、接、转、增、检.“切”就是将加入酶切位点的外源基因和拥有相同酶切位点的载体进行限制性内切酶酶切反应,克隆质粒可以单酶切也可以双酶切,要是做表达质粒就需要双酶切以确定正确的基因表达方向；“接”就是将前面用内切酶处理后有着相同粘性末端的外源基因和质粒载体通过连接酶连接起来,形成重组质粒；“转”就是将重组好的质粒载体转染宿主细胞,有热激还有电转等方法；“增”就是转入了重组质粒载体的宿主细胞增殖培养,通过抗性基因或其他筛选方式筛选含有目的质粒载体的阳性单克隆细胞增殖培养；“检”就是检验了,做克隆就是提取质粒之后PCR方法检验目的重组质粒和携带基因正确性,做表达就是通过表达蛋白相应检测方法检测外源基因表达情况,一般情况做克隆也是用于后面做表达,也就是一般步骤就是走一遍这五个字的克隆,再走一遍这五个字的表达.
可能不是非常准确差不多这意思吧,再往细里说东西有点多了,得细问了.
