蛋白酶K在什么温度下酶活性最大?需要多长时间?加多少量合适?

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蛋白酶K在什么温度下酶活性最大?需要多长时间?加多少量合适?
1个回答 分类:生物 2014-11-26

问题解答:

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蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶.它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键.此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性.由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶.
蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml.
在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性.
推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 .
孵育温度为55至65℃,理想孵育温度为58℃,孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时
 
 
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