真核重组质粒构建需要pMD18T载体么?

　　你的构建策略很好,不需要用T载体.
再问： 为什么有的文章里面用到pMD18T这个载体呢？它是什么作用，我不太明白
再答： 　　pMD18T是个T载体。如果PCR产物直接双酶切效果不好，可以先把PCR产物放到T载体里，然后再做酶切，转到你最终的载体里。
再问： 哦，可是转化后挑单菌落进行菌液pcr鉴定，条带不太亮但位置对，还需要什么别的方法鉴定么？
再答： 　　位置对就对了。不太亮无非是质粒浓度低，没有关系，只要达到测序要求浓度就行。