pet载体原核表达基因的终止密码子要加吗

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pet载体原核表达基因的终止密码子要加吗
1个回答 分类:语文 2014-10-19

问题解答:

我来补答
主要是看载体谱图和你自己需要的,一般pET系列载体有时候会为了表达的蛋白纯化方便,会在你的蛋白C端后面添加一些标签(如His Tag),这些标签后面都带有终止子.如果你觉得你不需要载体所自带的这些标签,你可以自己添加上终止子.如果你需要载体后面的一些东西的话,你可以不添加.当然,有些早期载体是没有带终止子的,需要你自己添加.对于要不要添加终止子,还是那句话,先研究具体载体的图谱结构,根据自己需要来选择添加或者不添加,如果实在看不懂载体结构,那么你就直接添加终止子上去,因为载体如果本身带有终止子的话也在你的序列后面,对你的蛋白本身并没有影响.
再问: 你的回答,我用的是pET-32(a+),他的图谱在T7启动子后有一个His tag 标签,在酶切位点后还有一个HIS tag标签,我想问我未去除终止密码子会导致只有N端有HIs tag标签,而C端没有,这样影响后面的纯化吗?
再答: 这个载体我用过,这个载体是融合表达的蛋白,his tag有两个,分别在融合蛋白的C端和你的目标蛋白的C端,你终止了你目标蛋白C端后的His tag后还有一个his tag对目标蛋白纯化是没有影响的。一个his tag就可以顺利的进行蛋白纯化。
 
 
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