高效液相色谱梯度淋洗中溶剂极性顺序如何?

对于反相的HPLC,梯度洗脱的流动相是有机相比例从小到大,水从大到小.
作为方法建立,可选择如下步骤：
1.乙腈-水（0：100）-（100：0）,没有选甲醇的原因是甲醇-水粘度大（尤其在与水大概55：45时）,这样如果可以换等度的时候柱压较高,又有背压调节的问题；
2.根据若干目标物出峰的时间,可以大致推算当时的流动相比例范围,找到1个比较精确的梯度表,注意,因为有柱前体积,出峰时刻显示的流动相比例与实际的柱上比例是有滞后的；
3.进一步的调整,以达到满意的分离效果,和尽量短的分析时间；
4.目标物如果是可解离的（酸性物质或碱性物质）,水相中可以加入酸（和或三乙胺）,或用buffer,如果是蛋白质、肽类,一般可加入三氟乙酸；
5.能够进一步调整的还有柱温和流速.
就我个人的意见,如果能用等度,还是尽量用等度洗脱.