25ul的PCR体系中,含有20ug/ml的蛋白酶K,对细菌基因组DNA的PCR反应有影响吗?纯化后的蛋白酶K没有DNA

蛋白酶K的活性还是很强的,需要85度1小时灭活.
如果不灭活直接做PCR,聚合酶活性会被蛋白酶K所抑制.
建议你做PCR之前将含蛋白酶K的DNA模板于水浴85度灭活1小时.这是我们实验室摄取基因组DNA的方法.有时候实验忙,我水浴过2小时3小时,PCR都没有问题.此过程DNA模板可能会有些降解,但对于做一般几百bp一两kB的PCR没什么影响.
有一两次我忘了85度灭活,PCR就P不出来任何东西,说明蛋白酶K的灭活是需要一定时间的,想依靠PCR刚开始那几分钟的95度高温是冒险的.