PCR产物酶切遇到的问题

问题描述:

PCR产物酶切遇到的问题
选择的内切酶 酶切位点是CC/WGG
  39                      75
  C  C/AGG……    C   C/TGG……
pcr产物 544   切割后出现40bp 36bp 468bp 酶切后如下图
较短酶切着产物看不清,而且电泳区分不开怎么办啊


上边的不是引物而据一,在另一个胶上跑了pcr产物和酶切产物,pcr产物的引物二聚体与这个条带不同。
左边那个条带是另一个试验的产物,不需要考虑。
1个回答 分类:生物 2014-09-20

问题解答:

我来补答
能说一下你这样酶切的目的么?40bp和36bp的条带,只相差4个bp,基本上在琼脂糖胶上就不用考虑分清楚了.最好使用聚丙烯酰胺凝胶,很多用变性聚丙烯酰胺凝胶,可以分离到碱基数相差很少的条带,而某些变性梯度聚丙烯酰胺胶,甚至能分辨只相差一个碱基的核酸.
所以如果你一定要分清40和36bp的带,就用聚丙烯酰胺试试.
 
 
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