Nickel pull-down assay

问题描述:

Nickel pull-down assay
1个回答 分类:综合 2014-09-17

问题解答:

我来补答
关于蛋白方面的?大概是镍洗脱...在用螯合介质纯化时用镍洗脱带6联His标签的蛋白(大概吧,提供详细信息)
再问: 主要是用来干什么呢?这个实验我搜中文都没有人做过。
再答: 不清你是哪方面的实验,如果是蛋白类的实验那么作用是用来纯化蛋白的.如果真如我所说的情况的话就不应该查文献,这是一个很基本纯化策略,应该去看教科书.
再问: 我看文献上是用来验证酵母双杂交结果的,应该是用来验证两个蛋白间的相互作用,但是没看懂。
再答: 那我了解了,Nickel pull-down assay是可以用来做双杂交的验证的,就是把靶蛋白与六连或者八联的组氨酸融合(在设计引物的时候在蛋白序列前加入6或8个His的序列,或者直接买带有His标签的商品化质粒),进行培养和诱导表达之后破碎后就可以进行纯化。固相纯化介质是金属螯合型介质,在使用前用硫酸镍冲洗使螯合镍离子。 His结构中的咪唑基团带较多额外阴离子,对金属阳离子有静电引力,故亲和力强,纯化时带有tag的靶蛋白就亲和在固相介质上。最后用高浓度咪唑冲洗,可得纯度较高的靶蛋白。 这只是一个用来验证双杂交表达结果的步骤,与双杂交本身无关。双杂交步骤太多,此处不再赘述。欲了解详情请见生物工程教科书或搜索“His tag 原理”
 
 
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