下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好

问题描述:

下一步要做real time pcr,逆转录引物怎么选择,随机引物和oligo dT引物选哪个比较好
real time pcr检测几个基因的表达量,现在提取rna后做逆转录,买的takara的逆转录试剂盒,不知道应该选随机引物还是oligo dT引物?我是小白,请大家给予建议啊
1个回答 分类:数学 2014-11-02

问题解答:

我来补答
显然是选random primer更好,其实说明书是有写的啦,原因是RT-PCR逆转录是要得到一个所有的RNA的cDNA库,然后再P出你要的“几个基因”,所以不是每个基因的mRNA都是有polyA的,很多都是没有的,microRNA,piRNA,很多都没有哦,所以如果你用oligo dT引物,就自然会miss掉很多(确实是很多)的RNA,而随机引物不会有这个问题,用它反转录出来的cDNA丰度更高,结果更加准确!
再问: 那反转录之后怎么检验呢?听说电泳的话会是一片。还是说反转录之后直接就做real time pcr?
再答: 反转录之后一般不检验的,那是一个pool啦,对的,电泳应该是smear,是的,直接按照梯度稀释和你的要求来做Q-PCR!
 
 
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