那是显然的,所以在提rna做pcr的时候,如果里面混了基因组dna,那就有可能导致假阳性
再问： 谢谢，但是这不是我想要的答案。请问做半定量RT-PCR的引物怎么设计？可以设计在基因的非翻译区，然后扩非翻译区来检测基因的表达水平吗？
再答： 半定量的pcr的结果，很多杂志都已经无法接受了，现在只是用它来验证有无表达，定量需要real time的。至于引物，通常都是直接在文献上查找已经报道的，影响因子越高越好了。实在找不到，可以用软件设计。 半定量的引物设计可以用primer 5.0 或6.0，real time的引物可以用Beacon Designer设计。 另外，real time的引物可以在这个网站查找，http://www.rtprimerdb.org/ 不过不一定有你要的。 要检测某基因的表达水平，难道不是检测其mran表达么？或者用报告基因了。不知道为什么设计在非翻译区呢？
再问： mRMA的长度是不是大于基因的CDS区？因为我要检测的基因是一个家族里的，所以想找一段特异的序列来扩，非翻译区是每个基因特异的，所以想用这一段来做检测。不知道对不对？
再答： 可以试试。用primer blast设计：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/ 个人建议，上游设在5’端，下游设在cds区，或者上游在cds区，下游在3‘端。 同一个家族的基因，只要不是同一个基因，把引物随便设计在什么位置肯定能区分的。不过这样设计的话，同一个基因的剪切体亚型通常是不能区分了。 所以这得看你是要区分同一基因的剪切体亚型，还是同一家族的不同基因。如果是后者，用不着设计在啥非翻译区。设计好了，blast检验一下。
