硅胶的预处理
我们以浓盐酸浸泡硅胶14小时,然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后,将起进行减压抽滤,后不断加蒸馏水冲洗.在1小时之后,抽滤的水呈中性,但仍然含有氯离子.经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子.晾干一周后,在110℃烘箱中活化2小时.
活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀.在装柱时,宜使用口径较大的玻璃漏斗置于 层析柱上部,注入1/2高的石油醚,打开下部活塞,然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗,这样可以防止层析柱中形成断层(这一步是实验的关键步骤).
装柱
装柱子（添硅胶）时,有两种方法：即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣.不论干法还是湿法,硅胶（固定相）的上表面一定要平整,并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右,太短了可能分离效果不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好.
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂"走柱子",本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡.
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实.接着是用淋洗剂"走柱子",一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂.通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度.干法装柱较方便,但最大的缺陷在于"走柱子"时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）,容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚,二氯甲烷更为明显.虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了.解决的办法是：第一、硅胶一定要天结实；第二、 一定要用较多的溶剂"走柱子",一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力.
也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂,防止添加溶剂的时候,使得样品层不再整齐.但我的感觉是如果小心上样,添加溶剂,则没有这个必要.
上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂.如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层.干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整.湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂,如果展开剂的溶解度不好,则可以用一极性较大的溶剂,但必须少量）将样品溶解后,再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁均匀加入.然后用少量 芗 洗涤后,再加入.湿法较方便,熟手一般采用此法
