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7 操作步骤
7.1 检样稀释及培养
7.1.1以无菌操作,取样25mL或25 g放入225mL灭菌生理盐水中,经充分振摇作成1：10均匀稀释液.
固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液.
7.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管,混合均匀,做成1∶100的稀释液.
7.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作顺序,做10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1mL火菌吸管.
7.1.4 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2～3个适宜稀释度,分别在做10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度做两个平皿.
7.1.5 稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL,并转动平皿使混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照
7.1.6 待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h.
7.2 菌落计数方法
做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏.在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数.
7.3 菌落计数的报告
7.3.1 平板菌落数的选择
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准.一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数.平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计.
7.3.2 稀释度的选择
7.3.2.1 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之(见表1中例1).
7.3.2.2 若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30～300之间,则视两者之比如何来决定.若其比值小于或等于2,应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3).
7.3.2.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4).
7.3.2.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5).
7.3.2.5 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6).
7.3.2.6 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之
